เน้นกลยุทธ์ที่มีประสิทธิภาพในการต่อต้านสายพันธุ์ COVID-19 พัฒนาโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่มีศักยภาพจากผู้รอดชีวิตจากไวรัสโคโรนากลุ่มอาการทางเดินหายใจเฉียบพลันรุนแรง (SARS-CoV) สล็อต ซึ่งได้รับการฉีดวัคซีนด้วย BNT162b2 ซึ่งมีเป้าหมายที่โดเมนการจับตัวรับ (RBD) ของเอนไซม์ที่สร้าง angiotensin-converting ของมนุษย์ 2 (huACE2) - ขึ้นอยู่กับ sarbecovirus

ในช่วง 20 ปีที่ผ่านมา มีการระบาดที่สำคัญ 3 ครั้งเกิดขึ้นเนื่องจากไวรัสโคโรนา จากสัตว์สู่คน : SARS-CoV, โรคระบบทางเดินหายใจตะวันออกกลาง (MERS-CoV) และการระบาดใหญ่ของ SARS-CoV-2 ที่กำลังดำเนินอยู่

ไวรัสเหล่านี้รวมถึงสายพันธุ์ที่เกิดขึ้นใหม่มีต้นกำเนิดจากสัตว์ เช่น ค้างคาวและลิ่น แอนติบอดีที่ทำให้เป็นกลาง (NAbs) เกิดขึ้นจากการติดเชื้อตามธรรมชาติหรือการฉีดวัคซีน มีบทบาทสำคัญในการต่อสู้กับการติดเชื้อเหล่านี้ อย่างไรก็ตาม การเกิดขึ้นของความกังวล (VOCs) ที่หลากหลายท้าทายการป้องกันนี้

ด้วยเหตุนี้ โมโนโคลนอลแอนติบอดีสำหรับการรักษา (mAbs) ซึ่งพัฒนาขึ้นอย่างรวดเร็วซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของการตอบสนองต่อโควิด-19 ทั่วโลกจึงมีความสำคัญ อย่างไรก็ตาม VOCs ที่กำลังพัฒนาได้ลดประสิทธิภาพของ mAbs ปัจจุบัน ทำให้จำเป็นต้องพัฒนาใหม่ที่มีประสิทธิภาพในการต่อต้าน sarbecoviruses ต่างๆ สล็อต 888

การศึกษานี้รวมผู้รอดชีวิตจากโรคซาร์สอายุ 51 ปีที่ได้รับการฉีดวัคซีน BNT162b2 เมื่อต้นปี 2564 หลังจากเก็บพลาสมาของผู้ป่วยแล้ว เซลล์เม็ดเลือดขาวชนิดโมโนนิวเคลียร์ในเลือดส่วนปลาย (PBMC) จะถูกสกัดและเก็บรักษาด้วยความเย็นเซลล์เหล่านี้ถูกย้อมสีในภายหลังสำหรับสารเตตระเมอร์ SARS-CoV RBD (SC1) และ SARS-CoV-2 RBD (SC2) เซลล์ B ถูกจัดเรียงแล้วแช่แข็งแฟลชเพื่อใช้ในอนาคต

การถอดความแบบย้อนกลับและปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสแบบซ้อน (PCR) ได้ดำเนินการในเซลล์ B ที่เรียงลำดับ ไพรเมอร์เฉพาะถูกใช้เพื่อขยายตระกูลยีนแต่ละตระกูล และผลิตภัณฑ์ PCR ถูกโคลนลงในเวกเตอร์การแสดงออกของ pTRIOZ

จากนั้น โครงสร้างเหล่านี้ถูกทรานส์เฟกเข้าไปในไตของเอ็มบริโอของมนุษย์ (HEK) 293 เซลล์ และส่วนเหนือตะกอนถูกทดสอบโดยใช้การทดสอบด้วยเอนไซม์ที่เชื่อมโยงกับอิมมูโนซอร์เบนต์แอสเซย์ (ELISA) และการทดสอบการวางตัวเป็นกลางของไวรัส (sVNT)

ตัวอย่างเซรั่มได้รับการทดสอบโดยใช้การทดสอบแบบมัลติเพล็กซ์ sVNT (m-sVNT) ที่พัฒนาขึ้นใหม่ ความเข้มข้นของแอนติบอดีถูกเจือจางและจากนั้นบ่มด้วย huACE2 ชนิดลูกผสม สารกลายพันธุ์ของ SARS-CoV-2 RBD ถูกทำให้บริสุทธิ์และเชื่อมต่อเข้ากับเม็ดบีดแม่เหล็ก

ไลบรารีแสดงยีสต์กลายพันธุ์แบบจุดเดียวของ SARS-CoV-2 RBD ถูกสร้างขึ้นและใช้เพื่อกำหนดผลกระทบของการกลายพันธุ์แต่ละครั้งต่อการจับหรือการแสดงออก

ความสัมพันธ์ในการจับของแอนติบอดีกับ SARS-CoV หรือโปรตีน RBD ของ SARS-CoV-2 ถูกวัดโดยไบโอเลเยอร์อินเทอร์ฟีโรเมทรีโดยใช้ Octet RED96e Pseudoviruses ถูกผลิตขึ้นและใช้เพื่อทดสอบความสามารถในการทำให้เป็นกลางของ mAbs

การทดสอบการวางตัวเป็นกลางของการลดคราบจุลินทรีย์ (PRNT) ใช้เพื่อประเมินเพิ่มเติมเกี่ยวกับความสามารถของแอนติบอดีในการต่อต้าน SARS-CoV-2 (สายพันธุ์บรรพบุรุษหรือ Omicron BA.1 และ BA.2)

ผลที่เป็นพิษต่อเซลล์ของแอนติบอดีต่อเซลล์ Vero E6 transmembrane protease, serine 2 (TMPRSS2) ได้รับการประเมินโดยการสอบวิเคราะห์ความมีชีวิตของเซลล์เรืองแสง CellTiter-Glo

การประมวลผลภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเลคตรอนด้วยความเย็น (Cryo-EM) ได้รวมเอากลุ่มออปติกเก้ากลุ่มตามค่าการเลื่อนภาพลำแสงสำหรับการประมวลผลใน RELION

โดยจะเกี่ยวข้องกับการจัดตำแหน่งเฟรมภาพยนตร์ การกำหนดพารามิเตอร์ฟังก์ชันการถ่ายโอนคอนทราสต์ การเลือกอนุภาค และการสกัด การจัดหมวดหมู่แบบ 2D ตามมาด้วยการเลือกแบบแมนนวลและการดึงคลาสที่ดี กระบวนการนี้นำไปสู่การสร้างโมเดล 3 มิติเริ่มต้นและการเลือกโมเดลที่ดี

ผลการศึกษาผลของการศึกษาปัจจุบันเปิดเผยว่าผู้รอดชีวิตจากโรคซาร์สที่ได้รับการฉีดวัคซีน BNT162b2 ผลิต NAbs ในวงกว้างที่มีประสิทธิภาพในการต่อต้านซาร์เบโคไวรัสที่ขึ้นกับ huACE2 สิบตัวจาก Clade-1a และ Clade-1b ซึ่งรวมถึงสายพันธุ์ของ SARS-CoV-2 และซาร์บีโคในสัตว์หลายสายพันธุ์

การเพิ่มปริมาณและการแยกเซลล์บีถูกดำเนินการโดยใช้ PBMC ของผู้บริจาค 23 วันหลังการให้ยาครั้งแรกของ BNT162b2เมื่อคัดแยกคลัสเตอร์ของดิฟเฟอเรนติเอชัน 19 (CD19 + ) เซลล์ B ที่จับกับ Tetramer ของ SARS-CoV และ SARS-CoV-2 RBD ยีนแอนติบอดีของพวกมันถูกขยาย โคลน และแสดงออกในหลอดทดลอง ทำให้ได้ชิ้นส่วนแคปปาหนักและเบา 19 คู่

ส่วนใหญ่มาจากเซลล์ B บวกสองเท่า โดยสองเซลล์มาจากเซลล์ SC2 + B และไม่มีเซลล์จาก SC1 + B เซลล์เดียวที่เป็นบวกนอกจาก mAbs ที่เพิ่งค้นพบแล้ว นักวิจัยยังได้รวม mAbs ที่เผยแพร่แล้ว 5 รายการสำหรับการเปรียบเทียบ แม้ว่า mAbs จากเซลล์ SC2 + single-positive B แสดงปฏิกิริยาต่อ SARS-CoV RBD น้อยที่สุด แต่จากเซลล์ SC1 + SC2 + B แสดงความสามารถในการทำให้เป็นกลางที่หลากหลาย

เลือก mAbs ที่ทำให้เป็นกลางที่มีศักยภาพสูงสุด 6 ชนิดสำหรับการกำหนดคุณลักษณะเพิ่มเติมและการผลิตขนาดใหญ่ ที่น่าสนใจคือ 3 กลุ่มใช้ชุดยีนสายโซ่หนักและสายเบาที่ไม่เหมือนใครซึ่งไม่เคยรายงานมาก่อน

ถัดไป ดำเนินการ sVNT 18 เพล็กซ์เพื่อวัดความกว้างและการทำงานของ mAbs ผลการวิจัยพบว่า mAbs แสดงความสามารถที่มีศักยภาพในการต่อต้าน sarbecoviruses ทั้ง 18 ตัวที่ทดสอบ ซึ่งบ่งชี้ถึงฤทธิ์ในการทำให้เป็นกลางในวงกว้างของพวกมัน

การศึกษายังตรวจสอบผลของการกลายพันธุ์ของกรดอะมิโน RBD แต่ละตัวต่อการจับกันของ mAbs และทำแผนที่รอยเท้าอีพิโทปของแต่ละ mAb บน RBD mAbs แสดงโปรไฟล์ epitope ที่แตกต่างกันอย่างชัดเจน พบว่า mAbs ส่วนใหญ่มีอีพิโทปที่ประกอบรวมด้วยเรซิดิวหลักภายในพื้นที่จำกัด ซึ่งบ่งชี้ถึงศักยภาพในการทำให้เป็นกลางในวงกว้าง

ในการพิจารณาความสัมพันธ์ของ mAbs กับ RBD ของการกลายพันธุ์ของ SARS-CoV-2 พบว่า mAbs ที่มีศักยภาพมากที่สุดจะจับอย่างแน่นหนากับการกลายพันธุ์ของ RBD ทั้งหมด ในขณะที่ CR3022 mAb แสดงความสัมพันธ์ในการจับที่ต่ำที่สุดกับการกลายพันธุ์ของ SARS-CoV-2 RBD ทั้งหมด

แม้จะมีฤทธิ์การจับในระดับปานกลางถึงดี แต่ mAbs บางตัวก็แสดงประสิทธิภาพต่ำในการทดสอบการยับยั้ง RBD-ACE2 ซึ่งบ่งชี้ว่าความสามารถในการจับไม่ได้เท่ากับความสามารถในการทำให้เป็นกลางเสมอไป

ประการสุดท้าย โครงสร้างชิ้นส่วนที่จับแอนติเจน (Fab) ของชิ้นส่วน E7 ที่ซับซ้อนด้วยเครื่องตัดแต่ง โปรตีนขัดขวาง SARS-CoV-2 แบบ รีคอม บิแนนท์ถูกกำหนดโดยใช้ cryo-EM อนุภาคเดี่ยว

มีการเปิดเผยว่า E7 จับกับ quaternary epitope ข้าม RBD "ขึ้น" และ RBD "ลง" ที่อยู่ใกล้เคียง ปฏิสัมพันธ์ส่วนใหญ่อยู่บน RBD ขึ้น

นักวิจัยรายงานเพิ่มเติมว่า mAbs E7 และ F5 แสดงกิจกรรมที่มีศักยภาพในการต่อต้าน Omicron subvariants BA.1 และ BA.2 อย่างไรก็ตาม มีเพียง E7 เท่านั้นที่รักษาศักยภาพในการทำให้เป็นกลางกับ BA.2 ในการทดสอบการทำให้เป็นกลางของไวรัสที่แท้จริง

แม้แต่สายพันธุ์ย่อยของ Omicron ที่ใหม่กว่า ซึ่งรวมถึง BQ.1.1 และ XBB.1 ก็ยังไวต่อ E7 ซึ่งบ่งชี้ว่าสายพันธุ์เหล่านี้ยังคงไวต่อโมโนโคลนอลแอนติบอดีนี้แม้ว่าจะมีการกลายพันธุ์มากขึ้นก็ตาม